產(chǎn)品簡介:

本試劑盒采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測小鼠血清、血漿、腦組織勻漿及神經(jīng)組織提取物中的多巴胺(DA)含量。檢測范圍覆蓋0.313-20 ng/mL,靈敏度達(dá)0.16 ng/mL,適用于神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)控、帕金森病、情緒調(diào)節(jié)及神經(jīng)退行性疾病相關(guān)研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱:小鼠多巴胺(DA)elisa試劑盒
英文名稱:DA ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品貨號:CS-1140E
檢測原理:

小鼠多巴胺 (DA) elisa試劑盒的原理是競爭法,通過固相載體包被抗原與樣本抗原競爭結(jié)合抗體,再用酶標(biāo)記二抗進(jìn)行識別,最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測。
固相化:微孔板預(yù)先包被小鼠DA人工抗原。
結(jié)合:加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本與特異性抗體混合液,樣本DA與固相抗原競爭結(jié)合抗體。
檢測:加入HRP標(biāo)記的二抗,與結(jié)合在固相載體上的抗體形成復(fù)合物。
顯色:加入TMB底物,被HRP催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測定:用酶標(biāo)儀在450nm波長測定吸光度(OD值),濃度與OD值成反比。
實驗步驟?:

?試劑準(zhǔn)備?:將試劑盒平衡至室溫(20-25℃),洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?:每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,37℃孵育90分鐘。
?洗滌?:棄去液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后甩干,重復(fù)5次。
?加檢測抗體?:每孔加入100μL檢測抗體-HRP,37℃孵育60分鐘。
?洗滌?:同步驟3。
?顯色?:每孔加入90μL TMB底物A+B混合液,37℃避光孵育15分鐘。
?終止?:每孔加入50μL終止液,立即搖勻(顏色由藍(lán)變黃)。
?檢測?:450nm波長測定吸光度(OD值),15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?:

?1、試劑與樣本準(zhǔn)備?:
將試劑盒平衡至室溫(20-25℃),按說明書稀釋洗滌緩沖液(通常1:19)。
?標(biāo)準(zhǔn)品?:用梯度稀釋至0.313、0.625、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL系列濃度。
?樣本?:血清、血漿或組織勻漿上清。若t-PA濃度高,可按說明書(如1:10)稀釋。
?2、加樣與孵育?:
每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本。
輕輕振蕩混勻,避免觸碰孔壁。
37℃孵育90分鐘(部分試劑盒可能為120分鐘,需以說明書為準(zhǔn))。
?3、洗滌?:
棄去孔內(nèi)液體,用洗滌緩沖液加滿每孔,靜置30秒后甩干,重復(fù)5-6次。
4?、加檢測抗體與孵育?:
每孔加入100μL化抗豬t-PA檢測抗體。
37℃孵育60分鐘。
5?、再次洗滌?:
同步驟3,洗去未結(jié)合抗體。
6?、顯色?:
每孔加入90-100μL TMB底物混合液(A液+B液)。
37℃避光孵育10-15分鐘。
?7、終止與測定?:
每孔加入50μL終止液,立即混勻(顏色由藍(lán)變黃)。
在加終止液后15分鐘內(nèi),用酶標(biāo)儀在450nm波長處測定各孔吸光度(OD值)。