產品簡介：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、細胞膜蛋白提取物、組織勻漿及細胞上清液中的 5'- 核苷酸酶，胞膜（NT5E/CD73）蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于嘌呤代謝、免疫抑制微環境、腫瘤代謝及細胞外核苷酸調控研究領域。
產品名稱：大鼠5'-核苷酸酶,胞膜elisa試劑盒
英文名稱：NT5E/CD73 ELISA Kit
產品規格：48T/96T
產品貨號：CS-6253E
檢測原理：
大鼠 5'- 核苷酸酶，胞膜 (NT5E/CD73) ELISA 試劑盒的原理是雙抗體夾心法，通過固相載體捕獲抗原，再用酶標記的檢測抗體進行識別，最后通過底物顯色反應來定量檢測。
固相化：微孔板預先包被抗大鼠 NT5E/CD73 抗體。
結合：加入標準品或樣本，NT5E/CD73 被固相抗體捕獲。
檢測：加入生物su化的抗大鼠 NT5E/CD73 抗體和 HRP 標記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍色變為黃色。
測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
實驗步驟?：
?試劑準備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標準品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標準品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍變黃）。
?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，15分鐘內完成。
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關鍵實操技巧：
1.加樣技巧
一次性換新槍頭，垂直貼孔壁低位加液；避免氣泡、飛濺交叉污染；整板加樣速度均勻統一。
2.溫育控溫
須37℃恒溫、封板膜嚴實防蒸發冷凝；時間嚴格卡死，過長背景高、過短信號低。
3.洗板核心
每孔注滿不溢出，浸泡≥30 s；拍干用無塵吸水紙，杜絕殘留；洗板不足直接高背景、假陽性。
4.樣本規范
杜溶血、脂濁、污染樣本；禁止反復凍融；嚴禁含 NaN?抑制 HRP 活性；濃度超標只用試劑盒配套稀釋液。
5.顯色與讀數
全避光；整板顯色時長一致；加終止液立刻讀數，放置越久數值漂移越大。
6.基礎質控
樣本、標準均做復孔；室溫潔凈避光操作；試劑分裝取用，減少反復開蓋失效。
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