本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞上清液中的胰島素樣生長因子結合蛋白 5(IGFBP-5)濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達 0.16 ng/mL,適用于骨代謝、細胞外基質結合、IGF 生物利用度及組織修復研究等領域。
產品名稱 |
大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白5elisa試劑盒 | 英文名稱 | IGFBP-5 ELISA Kit |
貨號 | CS-5289E | 規格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理:

固相化:微孔板預先包被抗大鼠 IGFBP-5 抗體。
結合:加入標準品或樣本,IGFBP-5 被固相抗體捕獲。
檢測:加入化的抗大鼠 IGFBP-5 抗體和 HRP 標記的親和素,形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復合物。
顯色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化由藍色變為黃色。
測定:用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。
樣本要求:

1. 樣本類型與處理
?血清?:使用無熱原/內毒素試管采集,避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清,-20℃保存,避免反復凍融。
?血漿?:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,離心后取上清。
?細胞上清?:1000×g離心10分鐘去除顆粒,-70℃保存。
?組織勻漿?:生理鹽水勻漿后離心取上清,-20℃保存。
2. 注意事項
樣本中禁止添加NaN3,以免抑制HRP活性。
細胞培養上清可能因細胞狀態等因素導致檢測波動,建議設復孔。
操作步驟:

1.加樣孵育
每孔精準加入 100μL 對應標準品 / 待測樣本,空白孔加等量樣本稀釋液;貼封板膜密封微孔板,置于 37℃恒溫孵育箱,避光孵育 90min,保證抗原抗體充分結合。
2.洗板
輕柔棄去孔內液體,吸水紙上快速拍干;每孔加滿洗滌工作液,靜置浸泡 30s,甩干拍凈;重復洗滌5 次,去除未結合雜質,降低背景值。
3.加酶結合物孵育
除空白孔外,每孔加入 100μL HRP 標記特異性檢測抗體;輕微水平晃板混勻,重新封板,37℃避光恒溫孵育 60min。
4.二次洗板
重復上述洗板操作 5 次,嚴格拍干孔內殘留液體,杜絕殘留洗液造成假陽性、數據偏差。
5.底物顯色
避光條件下,每孔加入 90μL TMB 底物顯色液,輕柔混勻;37℃避光精準孵育 10~15min,此時液體逐步顯現藍色,顯色深淺與待測物含量正相關。
6.反應終止
嚴格遵循加樣順序,每孔快速加入 50μL 酸性終止液,輕晃微孔板充分混勻,藍色即刻轉為黃色,終止酶促顯色反應。
7.上機讀數檢測
加終止液后15min 內,用酶標儀測定各孔 450nm 波長吸光度(OD 值);以標準品濃度為橫坐標、OD 值為縱坐標繪制標準曲線,擬合方程計算待測樣本目標蛋白濃度。
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