產(chǎn)品簡介:

本試劑盒采用競(jìng)爭法酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿中的血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)含量。檢測(cè)范圍覆蓋0.313-20 ng/mL,靈敏度達(dá)0.16 ng/mL,適用于血壓調(diào)節(jié)、腎素-血管緊張素系統(tǒng)激活、心血管疾病及腎臟功能相關(guān)研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱:大鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)elisa試劑盒
英文名稱:ANG-Ⅱ ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品貨號(hào):CS-5368E
檢測(cè)原理:

大鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ) elisa試劑盒的原理是競(jìng)爭法,通過固相載體包被抗原與樣本抗原競(jìng)爭結(jié)合抗體,再用酶標(biāo)記二抗進(jìn)行識(shí)別,最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測(cè)。
固相化:微孔板預(yù)先包被大鼠ANG-Ⅱ人工抗原。
結(jié)合:加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本與特異性抗體混合液,樣本ANG-Ⅱ與固相抗原競(jìng)爭結(jié)合抗體。
檢測(cè):加入HRP標(biāo)記的二抗,與結(jié)合在固相載體上的抗體形成復(fù)合物。
顯色:加入TMB底物,被HRP催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測(cè)定:用酶標(biāo)儀在450nm波長測(cè)定吸光度(OD值),濃度與OD值成反比。
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操作步驟?:

?1. 試劑準(zhǔn)備
將試劑盒所有組分平衡至室溫(20–25℃,≥30min);濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。
標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶,梯度稀釋,配置系列濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液,備用。
2. 實(shí)驗(yàn)流程
加樣:設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、樣本孔,每孔加入 100 μL 對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 待測(cè)樣本,封板,37℃恒溫孵育 90 min。
洗滌:棄凈孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌工作液,靜置 30 s,甩干拍凈,重復(fù)洗滌 5 次。
加酶結(jié)合物:每孔加入 100 μL HRP 標(biāo)記檢測(cè)抗體,封板混勻,37℃孵育 60 min。
洗滌:重復(fù)上述洗滌步驟 5 次,拍干微孔。
顯色:每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液,輕柔混勻,37℃避光顯色 15 min。
終止:按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液,輕晃混勻,溶液由藍(lán)轉(zhuǎn)黃。
讀數(shù):15 min 內(nèi),酶標(biāo)儀 450 nm 波長測(cè)定各孔 OD 值,擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本含量。
3. 關(guān)鍵質(zhì)控要點(diǎn)
全程孵育使用專用封板膜,防止液體蒸發(fā)、交叉污染。
洗滌充分為實(shí)驗(yàn)核心,殘留洗液易造成背景偏高、假陽性。
TMB 顯色液避光儲(chǔ)存,現(xiàn)用現(xiàn)加,嚴(yán)禁接觸氧化劑。
加終止液順序需與顯色加樣一致,避免局部色差、綠色殘留。