本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測(cè)大鼠腦組織勻漿、神經(jīng)細(xì)胞提取物中的神經(jīng)顆粒素(NG/NRGN)蛋白濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL,適用于突觸可塑性、學(xué)習(xí)記憶及神經(jīng)退行性疾病研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱:大鼠神經(jīng)顆粒素(NG/NRGN)elisa試劑盒
英文名稱:NG/NRGN ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品貨號(hào):CS-5527E
核心原理:

大鼠神經(jīng)顆粒素 (NG/NRGN) ELISA 試劑盒的原理是?雙抗體夾心法?,通過(guò)固相載體捕獲抗原,再用酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體進(jìn)行識(shí)別,最后通過(guò)底物顯色反應(yīng)來(lái)定量檢測(cè)。
?固相化?:微孔板預(yù)先包被抗大鼠 NG/NRGN 抗體。
?結(jié)合?:加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,NG/NRGN 被固相抗體捕獲。
?檢測(cè)?:加入生物su化的抗大鼠 NG/NRGN 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素,形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
?顯色?:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
?測(cè)定?:用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。
樣本要求:

1. 樣本類型與處理
?血清?:使用無(wú)熱原/內(nèi)毒素試管采集,避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清,-20℃保存,避免反復(fù)凍融。
?血漿?:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,離心后取上清。
?細(xì)胞上清?:1000×g離心10分鐘去除顆粒,-70℃保存。
?組織勻漿?:生理鹽水勻漿后離心取上清,-20℃保存。
2. 注意事項(xiàng)
樣本中禁止添加NaN3,以免抑制HRP活性。
細(xì)胞培養(yǎng)上清可能因細(xì)胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測(cè)波動(dòng),建議設(shè)復(fù)孔。
操作步驟:

試劑準(zhǔn)備將試劑盒平衡至室溫(20-25℃),濃縮洗滌液按 1:20 稀釋備用。標(biāo)準(zhǔn)品按說(shuō)明書進(jìn)行梯度稀釋,配制系列濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。
實(shí)驗(yàn)流程加樣:設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔,空白孔僅加稀釋液,其余孔分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品,37℃孵育。加酶標(biāo)抗體:除空白孔外,每孔加入酶標(biāo)抗體,輕輕混勻,37℃避光孵育。洗滌:棄去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后甩干,重復(fù)洗滌 4-5 次,最后拍干殘留液體。顯色:每孔加入 TMB 顯色液,37℃避光孵育,孔內(nèi)呈現(xiàn)藍(lán)色。終止:每孔加入終止液,混勻后顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色。檢測(cè):在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定各孔 OD 值,15 分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。
關(guān)鍵提示實(shí)驗(yàn)全程嚴(yán)格控溫,孵育時(shí)使用封板膜避免蒸發(fā)。洗滌需充分,否則易造成高背景、結(jié)果偏差。顯色液需避光,終止順序與加樣順序保持一致,確保充分混勻。
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