本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞上清液中的 HSP-27 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于細胞骨架保護、抗凋亡、氧化應激、炎癥損傷及心血管病變研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 |
大鼠熱休克蛋白27(HSP-27)elisa試劑盒 | 英文名稱 | HSP-27 ELISA Kit |
貨號 | CS-5555E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理：
固相化：微孔板預先包被抗大鼠 HSP-27 抗體。
結(jié)合：加入標準品或樣本，HSP-27 被固相抗體捕獲。
檢測：加入化的抗大鼠 HSP-27 抗體和 HRP 標記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍色變?yōu)辄S色。
測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細胞培養(yǎng)上清可能因細胞狀態(tài)等因素導致檢測波動，建議設(shè)復孔。
操作步驟：
1.平衡試劑：試劑盒室溫平衡 30 min，濃縮洗滌液按比例稀釋備用。
2.加樣：設(shè)空白孔、標準品孔、樣品孔，每孔加對應標準品 / 稀釋后樣本，封板溫育。
3.溫育反應：37℃孵育 30–60 min，完成抗原抗體結(jié)合。
4.洗板：棄液甩干，洗滌液注滿每孔，浸泡后拍干，重復洗板3–5 次。
5.加酶結(jié)合物：除空白孔外，每孔加入 HRP 標記抗體，封板 37℃再次溫育。
6.再次洗板：同上述洗板流程，洗凈未結(jié)合游離酶標物。
7.顯色：每孔先后加入 A、B 顯色液，避光 37℃顯色 10–15 min。
8.終止讀數(shù)：加終止液終止反應，顏色由藍變黃；立即用酶標儀在對應波長測定 OD 值。
9.結(jié)果計算：以標準品濃度、OD 值繪制標準曲線，換算樣本待測指標濃度。
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