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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞上清液中的腎病蛋白（nephrin）濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于腎小球足細胞裂隙膜、蛋白尿、腎屏障損傷及腎小球病變研究等領域。

核心原理：

固相化：微孔板預先包被抗大鼠 nephrin 抗體。

結合：加入標準品或樣本，nephrin 被固相抗體捕獲。

檢測：加入化的抗大鼠 nephrin 抗體和 HRP 標記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍色變為黃色。

測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 樣本處理

1) 血清：無菌無熱源采血管采集，避免溶血 / 脂血；1000×g 離心 10 min 取上清，-20℃分裝，禁反復凍融。

2) 血漿：EDTA / 檸檬酸鹽抗凝（慎用肝素），離心分離上清。

3) 細胞上清：1000×g 離心除碎片，-70~-80℃保存。

4) 組織勻漿：預冷 PBS / 生理鹽水冰上勻漿，高速離心取清亮上清低溫保存。

2. 通用注意

嚴禁加NaN3抑制 HRP 活性；杜絕溶血、渾濁、污染樣本；全程低溫防降解；超標樣本用試劑盒專用稀釋液稀釋，實驗建議設置復孔。

操作步驟：

1. 試劑回溫至 20–25℃，稀釋洗滌液、梯度配制標準品。

2. 每孔加 100μL 標準 / 樣本，37℃孵育 90min，洗板 5 次。

3. 加 HRP 抗體，37℃孵育 60min，再次洗板 5 次。

4. 加 TMB 避光顯色 15min，加終止液混勻。

5. 450nm 快速測 OD 值，擬合曲線算濃度。

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