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產(chǎn)品簡介：

本試劑盒采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、尿液中的膠原吡啶交聯(lián)（PYD）含量。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于骨吸收、膠原降解及骨質(zhì)疏松癥研究等領(lǐng)域。

產(chǎn)品名稱：大鼠膠原吡啶交聯(lián)(PYD)elisa試劑盒

英文名稱：PYD ELISA Kit

產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T

產(chǎn)品貨號(hào)：CS-5770E

檢測(cè)原理：

大鼠膠原吡啶交聯(lián) (PYD) ELISA 試劑盒的原理是?競爭法?，通過固相載體包被抗原，樣本中抗原與固相抗原競爭結(jié)合特異性抗體，最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測(cè)。

?固相化?：微孔板預(yù)先包被 PYD 人工抗原。

?結(jié)合?：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本與特異性抗體混合液，PYD 與固相抗原競爭結(jié)合抗體。

?檢測(cè)?：加入 HRP 標(biāo)記的二抗，與結(jié)合在固相載體上的抗體形成復(fù)合物。

?顯色?：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

?測(cè)定?：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成反比。

實(shí)驗(yàn)步驟?：

?試劑準(zhǔn)備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。

?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。

?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。

?加檢測(cè)抗體?：每孔加入100μL檢測(cè)抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。

?洗滌?：同步驟3。

?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。

?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。

?檢測(cè)?：450nm波長測(cè)定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作步驟?：

1. 試劑準(zhǔn)備

將試劑盒所有組分平衡至室溫（20–25℃，≥30min）；濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。

標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶，梯度稀釋，配置系列濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。

2. 實(shí)驗(yàn)流程

加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、樣本孔，每孔加入 100 μL 對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 待測(cè)樣本，封板，37℃恒溫孵育 90 min。

洗滌：棄凈孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌工作液，靜置 30 s，甩干拍凈，重復(fù)洗滌 5 次。

加酶結(jié)合物：每孔加入 100 μL HRP 標(biāo)記檢測(cè)抗體，封板混勻，37℃孵育 60 min。

洗滌：重復(fù)上述洗滌步驟 5 次，拍干微孔。

顯色：每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻，37℃避光顯色 15 min。

終止：按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液，輕晃混勻，溶液由藍(lán)轉(zhuǎn)黃。

讀數(shù)：15 min 內(nèi)，酶標(biāo)儀 450 nm 波長測(cè)定各孔 OD 值，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本含量。

3. 關(guān)鍵質(zhì)控要點(diǎn)

全程孵育使用專用封板膜，防止液體蒸發(fā)、交叉污染。

洗滌充分為實(shí)驗(yàn)核心，殘留洗液易造成背景偏高、假陽性。

TMB 顯色液避光儲(chǔ)存，現(xiàn)用現(xiàn)加，嚴(yán)禁接觸氧化劑。

加終止液順序需與顯色加樣一致，避免局部色差、綠色殘留。