產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠組織勻漿、細胞核 / 質(zhì)提取物中的母親 DPP 同源物 4（Smad 4）蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于 TGF-β 信號通路、細胞增殖分化及腫瘤發(fā)生研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：大鼠母親DPP同源物4(Smad 4)elisa試劑盒
英文名稱：Smad 4 ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
產(chǎn)品貨號：CS-5635E
檢測原理：
大鼠母親 DPP 同源物 4 (Smad 4) ELISA 試劑盒的原理是?雙抗體夾心法?，通過固相載體捕獲抗原，再用酶標記的檢測抗體進行識別，最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測。
?固相化?：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 Smad 4 抗體。
?結(jié)合?：加入標準品或樣本，Smad 4 被固相抗體捕獲。
?檢測?：加入生物su化的抗大鼠 Smad 4 抗體和 HRP 標記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復(fù)合物。
?顯色?：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍色變?yōu)辄S色。
?測定?：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
實驗步驟?：
?試劑準備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標準品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標準品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍變黃）。
?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。
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關(guān)鍵實操技巧：
1.加樣技巧
一次性換新槍頭，垂直貼孔壁低位加液；避免氣泡、飛濺交叉污染；整板加樣速度均勻統(tǒng)一。
2.溫育控溫
須37℃恒溫、封板膜嚴實防蒸發(fā)冷凝；時間嚴格卡死，過長背景高、過短信號低。
3.洗板核心
每孔注滿不溢出，浸泡≥30 s；拍干用無塵吸水紙，杜絕殘留；洗板不足直接高背景、假陽性。
4.樣本規(guī)范
杜溶血、脂濁、污染樣本；禁止反復(fù)凍融；嚴禁含 NaN?抑制 HRP 活性；濃度超標只用試劑盒配套稀釋液。
5.顯色與讀數(shù)
全避光；整板顯色時長一致；加終止液立刻讀數(shù)，放置越久數(shù)值漂移越大。
6.基礎(chǔ)質(zhì)控
樣本、標準均做復(fù)孔；室溫潔凈避光操作；試劑分裝取用，減少反復(fù)開蓋失效。
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