產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測(cè)大鼠組織勻漿、細(xì)胞外基質(zhì)提取物中的硫酸乙酰肝素蛋白多糖 2(HSPG2)蛋白濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL,適用于細(xì)胞黏附、組織發(fā)育及腫瘤侵襲研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱:大鼠硫酸乙酰肝素蛋白多糖2(HSPG2)elisa試劑盒
英文名稱:HSPG2 ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品貨號(hào):CS-5653E
檢測(cè)原理:

大鼠硫酸乙酰肝素蛋白多糖 2 (HSPG2) ELISA 試劑盒的原理是?雙抗體夾心法?,通過固相載體捕獲抗原,再用酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體進(jìn)行識(shí)別,最后通過底物顯色反應(yīng)來(lái)定量檢測(cè)。
?固相化?:微孔板預(yù)先包被抗大鼠 HSPG2 抗體。
?結(jié)合?:加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,HSPG2 被固相抗體捕獲。
?檢測(cè)?:加入生物su化的抗大鼠 HSPG2 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素,形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
?顯色?:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
?測(cè)定?:用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。
實(shí)驗(yàn)步驟?:

1. 試劑回溫至 20–25℃,稀釋洗滌液、梯度配制標(biāo)準(zhǔn)品。
2. 每孔加 100μL 標(biāo)準(zhǔn) / 樣本,37℃孵育 90min,洗板 5 次。
3. 加 HRP 抗體,37℃孵育 60min,再次洗板 5 次。
4. 加 TMB 避光顯色 15min,加終止液混勻。
5. 450nm 快速測(cè) OD 值,擬合曲線算濃度。
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操作步驟?:

?1、試劑與樣本準(zhǔn)備?:
將試劑盒平衡至室溫(20-25℃),按說(shuō)明書稀釋洗滌緩沖液(通常1:19)。
?標(biāo)準(zhǔn)品?:用梯度稀釋至0.313、0.625、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL系列濃度。
?樣本?:血清、血漿或組織勻漿上清。若t-PA濃度高,可按說(shuō)明書(如1:10)稀釋。
?2、加樣與孵育?:
每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本。
輕輕振蕩混勻,避免觸碰孔壁。
37℃孵育90分鐘(部分試劑盒可能為120分鐘,需以說(shuō)明書為準(zhǔn))。
?3、洗滌?:
棄去孔內(nèi)液體,用洗滌緩沖液加滿每孔,靜置30秒后甩干,重復(fù)5-6次。
4?、加檢測(cè)抗體與孵育?:
每孔加入100μL化抗豬t-PA檢測(cè)抗體。
37℃孵育60分鐘。
5?、再次洗滌?:
同步驟3,洗去未結(jié)合抗體。
6?、顯色?:
每孔加入90-100μL TMB底物混合液(A液+B液)。
37℃避光孵育10-15分鐘。
?7、終止與測(cè)定?:
每孔加入50μL終止液,立即混勻(顏色由藍(lán)變黃)。
在加終止液后15分鐘內(nèi),用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光度(OD值)。