產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的肺炎支原體IgG抗體濃度。檢測范圍覆蓋0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá)0.16 ng/mL，適用于肺炎支原體感染診斷及免疫應(yīng)答研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠肺炎支原體(IgG)elisa試劑盒 | 英文名稱 | IgG ELISA Kit |
貨號 | CS-1126E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
檢測原理：
固相化：微孔板預(yù)先包被肺炎支原體抗原。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，其中的肺炎支原體IgG抗體與固相抗原結(jié)合。
檢測：加入純化的抗小鼠IgG抗體和HRP標(biāo)記的親和素，形成"抗原-抗體-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。
顯色：加入TMB底物，被HRP催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測定：用酶標(biāo)儀在450nm波長測定吸光度(OD值)，抗體濃度與OD值成正比。
實(shí)驗(yàn)步驟?：
?試劑準(zhǔn)備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。
?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?：
1. 試劑準(zhǔn)備
將試劑盒所有組分平衡至室溫（20–25℃，≥30min）；濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。
標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶，梯度稀釋，配置系列濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。
2. 實(shí)驗(yàn)流程
加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、樣本孔，每孔加入 100 μL 對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 待測樣本，封板，37℃恒溫孵育 90 min。
洗滌：棄凈孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌工作液，靜置 30 s，甩干拍凈，重復(fù)洗滌 5 次。
加酶結(jié)合物：每孔加入 100 μL HRP 標(biāo)記檢測抗體，封板混勻，37℃孵育 60 min。
洗滌：重復(fù)上述洗滌步驟 5 次，拍干微孔。
顯色：每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻，37℃避光顯色 15 min。
終止：按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液，輕晃混勻，溶液由藍(lán)轉(zhuǎn)黃。
讀數(shù)：15 min 內(nèi)，酶標(biāo)儀 450 nm 波長測定各孔 OD 值，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本含量。
3. 關(guān)鍵質(zhì)控要點(diǎn)
全程孵育使用專用封板膜，防止液體蒸發(fā)、交叉污染。
洗滌充分為實(shí)驗(yàn)核心，殘留洗液易造成背景偏高、假陽性。
TMB 顯色液避光儲存，現(xiàn)用現(xiàn)加，嚴(yán)禁接觸氧化劑。
加終止液順序需與顯色加樣一致，避免局部色差、綠色殘留。
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