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產(chǎn)品簡介：

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的基質(zhì)金屬蛋白酶 9 / 明膠酶 B（MMP-9/Gelatinase B）蛋白濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于細(xì)胞外基質(zhì)降解、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移及炎癥反應(yīng)研究等領(lǐng)域。

產(chǎn)品名稱：大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶Belisa試劑盒

英文名稱：MMP-9/Gelatinase B ELISA Kit

產(chǎn)品規(guī)格：48T/9

檢測(cè)原理：

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶 9 / 明膠酶 B (MMP-9/Gelatinase B) ELISA 試劑盒的原理是?雙抗體夾心法?，通過固相載體捕獲抗原，再用酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體進(jìn)行識(shí)別，最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測(cè)。

?固相化?：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 MMP-9 抗體。

?結(jié)合?：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，MMP-9 被固相抗體捕獲。

?檢測(cè)?：加入生物su化的抗大鼠 MMP-9 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。

?顯色?：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

?測(cè)定?：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

實(shí)驗(yàn)步驟?：

?試劑準(zhǔn)備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。

?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。

?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。

?加檢測(cè)抗體?：每孔加入100μL檢測(cè)抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。

?洗滌?：同步驟3。

?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。

?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。

?檢測(cè)?：450nm波長測(cè)定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作步驟?：

1.試劑準(zhǔn)備

將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），濃縮洗滌液按 1:20 稀釋備用。

標(biāo)準(zhǔn)品按說明書進(jìn)行梯度稀釋，配制系列濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。

2.實(shí)驗(yàn)流程

加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔，空白孔僅加稀釋液，其余孔分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品，37℃孵育。

加酶標(biāo)抗體：除空白孔外，每孔加入酶標(biāo)抗體，輕輕混勻，37℃避光孵育。

洗滌：棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后甩干，重復(fù)洗滌 4-5 次，最后拍干殘留液體。

顯色：每孔加入 TMB 顯色液，37℃避光孵育，孔內(nèi)呈現(xiàn)藍(lán)色。

終止：每孔加入終止液，混勻后顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色。

檢測(cè)：在 450nm 波長下測(cè)定各孔 OD 值，15 分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。

3.關(guān)鍵提示

實(shí)驗(yàn)全程嚴(yán)格控溫，孵育時(shí)使用封板膜避免蒸發(fā)。

洗滌需充分，否則易造成高背景、結(jié)果偏差。

顯色液需避光，終止順序與加樣順序保持一致，確保充分混勻。