產品簡介:

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測大鼠組織勻漿、細胞膜提取物中的封閉蛋白 4(CLDN4)蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達 0.16 ng/mL,適用于上皮屏障功能、細胞連接、腫瘤侵襲及炎癥反應研究等領域。
產品名稱:大鼠封閉蛋白4(CLDN4)elisa試劑盒
英文名稱:CLDN4 ELISA Kit
產品規格:48T/96T
產品貨號:CS-5932E
檢測原理:

大鼠封閉蛋白 4 (CLDN4) ELISA 試劑盒的原理是?雙抗體夾心法?,通過固相載體捕獲抗原,再用酶標記的檢測抗體進行識別,最后通過底物顯色反應來定量檢測。
?固相化?:微孔板預先包被抗大鼠 CLDN4 抗體。
?結合?:加入標準品或樣本,CLDN4 被固相抗體捕獲。
?檢測?:加入生物su化的抗大鼠 CLDN4 抗體和 HRP 標記的親和素,形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復合物。
?顯色?:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由藍色變為黃色。
?測定?:用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。
實驗步驟?:

?試劑準備?:將試劑盒平衡至室溫(20-25℃),洗滌緩沖液按1:19稀釋。標準品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?:每孔加入100μL標準品或樣本,37℃孵育90分鐘。
?洗滌?:棄去液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后甩干,重復5次。
?加檢測抗體?:每孔加入100μL檢測抗體-HRP,37℃孵育60分鐘。
?洗滌?:同步驟3。
?顯色?:每孔加入90μL TMB底物A+B混合液,37℃避光孵育15分鐘。
?終止?:每孔加入50μL終止液,立即搖勻(顏色由藍變黃)。
?檢測?:450nm波長測定吸光度(OD值),15分鐘內完成。
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操作步驟?:

1. 試劑準備
將試劑盒所有組分平衡至室溫(20–25℃,≥30min);濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。
標準品用標準品稀釋液復溶,梯度稀釋,配置系列濃度梯度標準溶液,備用。
2. 實驗流程
加樣:設置空白孔、標準孔、樣本孔,每孔加入 100 μL 對應標準品 / 待測樣本,封板,37℃恒溫孵育 90 min。
洗滌:棄凈孔內液體,每孔加滿洗滌工作液,靜置 30 s,甩干拍凈,重復洗滌 5 次。
加酶結合物:每孔加入 100 μL HRP 標記檢測抗體,封板混勻,37℃孵育 60 min。
洗滌:重復上述洗滌步驟 5 次,拍干微孔。
顯色:每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液,輕柔混勻,37℃避光顯色 15 min。
終止:按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液,輕晃混勻,溶液由藍轉黃。
讀數:15 min 內,酶標儀 450 nm 波長測定各孔 OD 值,擬合標準曲線計算樣本含量。
3. 關鍵質控要點
全程孵育使用專用封板膜,防止液體蒸發、交叉污染。
洗滌充分為實驗核心,殘留洗液易造成背景偏高、假陽性。
TMB 顯色液避光儲存,現用現加,嚴禁接觸氧化劑。
加終止液順序需與顯色加樣一致,避免局部色差、綠色殘留。