產品簡介：
本試劑盒采用競爭法酶聯免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿中的補體片斷 5a（C5a）含量。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于補體系統激活、炎癥反應、過敏反應及自身免疫病研究等領域。
產品名稱：大鼠補體片斷5a(C5a)elisa試劑盒
英文名稱：C5a ELISA Kit
產品規格：48T/96T
產品貨號：CS-6037E
檢測原理：
大鼠補體片斷 5a (C5a) ELISA 試劑盒的原理是?競爭法?，通過固相載體包被抗原，樣本中抗原與固相抗原競爭結合特異性抗體，最后通過底物顯色反應來定量檢測。
?固相化?：微孔板預先包被 C5a 人工抗原。
?結合?：加入標準品或樣本與特異性抗體混合液，C5a 與固相抗原競爭結合抗體。
?檢測?：加入 HRP 標記的二抗，與結合在固相載體上的抗體形成復合物。
?顯色?：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍色變為黃色。
?測定?：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成反比。
實驗步驟?：
?試劑準備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標準品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標準品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍變黃）。
?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，15分鐘內完成。
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操作步驟?：
1.加樣孵育
每孔精準加入 100μL 對應標準品 / 待測樣本，空白孔加等量樣本稀釋液；貼封板膜密封微孔板，置于 37℃恒溫孵育箱，避光孵育 90min，保證抗原抗體充分結合。
2.洗板
輕柔棄去孔內液體，吸水紙上快速拍干；每孔加滿洗滌工作液，靜置浸泡 30s，甩干拍凈；重復洗滌5 次，去除未結合雜質，降低背景值。
3.加酶結合物孵育
除空白孔外，每孔加入 100μL HRP 標記特異性檢測抗體；輕微水平晃板混勻，重新封板，37℃避光恒溫孵育 60min。
4.二次洗板
重復上述洗板操作 5 次，嚴格拍干孔內殘留液體，杜絕殘留洗液造成假陽性、數據偏差。
5.底物顯色
避光條件下，每孔加入 90μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻；37℃避光精準孵育 10~15min，此時液體逐步顯現藍色，顯色深淺與待測物含量正相關。
6.反應終止
嚴格遵循加樣順序，每孔快速加入 50μL 酸性終止液，輕晃微孔板充分混勻，藍色即刻轉為黃色，終止酶促顯色反應。
7.上機讀數檢測
加終止液后15min 內，用酶標儀測定各孔 450nm 波長吸光度（OD 值）；以標準品濃度為橫坐標、OD 值為縱坐標繪制標準曲線，擬合方程計算待測樣本目標蛋白濃度。
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